人生就是博-尊龙凯时的细胞培养步骤详解，为您提供优质的生物医疗实验指导。以下是A-673细胞的培养条件及注意事项。

培养条件

气相：95%空气与5%二氧化碳；温度设定为37℃。所用培养基为DMEM，添加10%胎牛血清（FBS）及1%青霉素/链霉素（P/S）以支持细胞附着生长。

A-673细胞背景

A-673细胞株来源于一名15岁女性的横纹肌肉瘤，能够在软琼脂上形成克隆，并在免疫抑制的鼠模型中表现出良好的肿瘤形成能力。其细胞系具有四条以上的特征性染色体，伴随一个额外的F染色体和两个异常的B染色体。

细胞传代方法

细胞在培养至良好状态后，推荐的传代比例为1:2。传代前应在收液后立即进行处理，确保细胞库存充足。为了运输细胞，建议将细胞灌满完全培养液并封好瓶口，保证良好的运输状态。

细胞培养步骤

细胞传代步骤如下：

1. 若培养瓶中的细胞未达到80%汇合度，收集培养液留存5ml于37℃、5%CO2的孵箱中培养。
2. 当细胞密度超过80%时，进行细胞传代。首先弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
3. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞变圆且脱落，迅速回到操作台，轻敲培养瓶后加入5ml完全培养基终止消化。
4. 轻轻吹打使细胞完全脱落并吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并补充1-2ml完全培养基重悬。
5. 将细胞悬液按1:2比例分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

对悬浮培养的细胞进行传代时，原细胞液可通过以下步骤进行处理：

1. 采用半换液法：竖放培养瓶在箱内静置1小时，轻轻吸去3ml培养基，补充3ml全培养基。
2. 如果需要分瓶，将细胞悬液收集于离心管中，以1000rpm离心5分钟，弃去上清后重悬并分至新T25瓶。

细胞冻存步骤

为了便于长期保存，细胞冻存的步骤如下：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，使用PBS清洗细胞。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态并在结束消化后转移至离心管。1000rpm离心5分钟，去掉上清。
3. 沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液，混匀并放入冻存管中。
4. 将细胞管放入-80℃冰箱，24小时后可转入液氮罐保存。

细胞复苏步骤

细胞复苏需注意：

1. 从液氮中取出冻存管，快速置于37℃水浴中解冻，擦拭外壁后将细胞移至新培养基中，离心处理。
2. 弃上清后重悬细胞，接种于T25培养瓶，放入培养箱中继续培养。

特别注意，某些细胞在运输过程中可能会脱落，属于正常现象。您可以通过收集培养液至离心管，重新调整细胞悬液，以确保细胞状态良好。进一步的传代可依照1:2比例进行，后续关注培养基更新和细胞状态。

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