猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

产品信息

产品名称：猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)
包装规格：96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

使用目的

猪瘟是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的一种高度接触性、出血性和致死性的传染病，特点包括高热及由微血管壁变性造成的广泛出血、坏死和梗塞等。该试剂盒用于检测猪血清中的猪瘟病毒抗体，并可评估猪瘟病毒疫苗的免疫效果。

原理概述

本试剂盒由预包被的猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他辅助试剂组成，采用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清和血浆中的猪瘟病毒抗体。实验中，将对照血清和待检样本添加至酶标板，经过温育后若样品中含有抗体，就会与板上的抗原结合。通过后续的反应步骤，可以形成与抗体含量成正相关的蓝色产物。最后，通过在450nm波长下测定吸光值，即可判定样品是否含有猪瘟病毒抗体。

试剂盒组成及储存

储存条件为2～8℃，有效期为12个月。开封后的包被板应在2～8℃避光保存，且应在2个月内使用完毕。

适用仪器

本试剂盒适用于含有450nm和630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备和可调微量移液器。

样品准备

1. 采用常规方法从动物全血中制备血清，应确保血清清亮、无溶血、无污染。样品可在2～8℃保存一周，长期保存应置于-20℃。
2. 用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl稀释液中，充分混合）。阴性和阳性对照不需稀释。
3. 恢复浓缩洗涤液至室温后，使用蒸馏水或去离子水按20倍稀释成工作洗涤液（如19份蒸馏水或去离子水加1份浓缩洗涤液）。

检验步骤

1. 使用前将试剂盒在室温下放置30分钟，使其恢复至室温。
2. 取所需酶标板条，设定阴性和阳性对照各2孔，未用的板条应快速密封并保存在2～8℃。
3. 向阴、阳性对照孔分别加入100μl的对照液；每个样品孔加入稀释后的样品100μl。
4. 混匀后盖上盖板膜，放于37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。
5. 弃去孔内液体，每孔添加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 每孔加入100μl酶标记物，盖好盖板膜，置于37℃避光反应30分钟。
7. 重复洗涤步骤5。
8. 每孔依次添加50μl的底物液A和底物液B，混匀，盖好盖板膜，在37℃避光反应10分钟。
9. 每孔加入50μl终止液，混匀，于450nm（可使用630nm作为参考波长）测定各孔的吸光值。

参考值与结果判定

在正常实验条件下，阴性对照的平均OD值应≤0.3，阳性对照的平均OD值应≥0.6。样品的OD值记为ODS，计算阈值：SP值=(ODS-ODNC)/(ODPC-ODNC)；SP值≥0.2判定为阳性，SP值<0.2判定为阴性。如结果为阴性，表示猪只抗体水平不足，建议补种相应疫苗。

实验局限性

本实验仅作为一种定性检测工具用于猪血清和血浆中猪瘟病毒抗体的检测，SP值的高低可提供抗体水平的粗略评估。

注意事项

1. 实验过程中需佩戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度，处理实验废弃物时应遵循传染物处理标准。
2. 终止液具有腐蚀性，避免与皮肤和衣物接触，若不慎接触，请立即用大量自来水冲洗。
3. 酶标板需在恢复至室温后方可开封，未用完的部分需放入干燥剂密封保存。
4. 使用前浓缩洗涤液需恢复至室温，以避免结晶。
5. 洗涤时应确保每孔加满液体，以彻底洗净孔中游离酶。
6. 需使用新鲜样品进行检测。
7. 结果判定应以酶标仪读数为准。
8. 不同批次的试剂组件不得混合使用。

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